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        如何保證合適的蛋白轉印到膜上
        瀏覽次數:1發布日期:2021-09-16
             

               質量差的蛋白轉印在免疫印跡的過程中會導致要么比較弱的信號要么沒有信號. 盡管質量差的蛋白轉印時有發生,科學家們通常不把它作為一

        個免疫印跡實驗失敗的原因。因此,當需要排除質量差的信號的原因時轉膜的質量好壞需要首先被考慮. 

        導致轉膜差的原因

               質量差的蛋白轉印可能發生在抗原水平低的情況下。這種情況的發生通常是因為要么轉膜步驟差或膠沒有足夠的裝載. 在實驗室中,這在免疫

        印跡中會作為錯誤發生從而導致信號的缺失。為了使轉印成功膜需要有更高水平的抗原.

               也會有轉印膜自己的問題或者操作時間長短,因為蛋白轉印或許需要更長時間取決于實驗人員使用的產品. 如果一個蛋白轉印被中斷或者沒有

        給與足夠的時間, 那么轉印或許不能產生足夠強度的信號。 

               另外一個導致質量差轉膜的原因是抗體濃度。如果濃度太高或太低, 那么會有很少或者沒有信號的轉移。 你可以分辨出濃度是否太高因為棕

        / 微黃色的條帶會在膜上出現。

              被捕獲的氣泡會提供一個天然屏障對于蛋白轉印,這會導致膜和轉印的區域是空白的。在真正印跡的過程中很難識別這些捕獲的氣泡, 這會導

        致印跡的失敗而沒有任何物理的暗示為什么會失敗。 

        阻止和檢測質量差的蛋白轉印

              因為蛋白轉印經常被忽視, 實驗室人員或許想要整合蛋白確認的過程. 蛋白轉印可以通過使用反向染色來進行確認,這會發現任何特定性的問題

        比如大氣泡這些氣泡會阻止某些區域不能得到轉印。

              有很少的方法可以完全解決氣泡問題. 反而,較好的方法是檢測印跡來看是否有氣泡。不進行染色的話, 大大部分氣泡不會被注意到從而導致

        最終信號的缺失。

              除了染色的方法之外,也有其他的產品,比如 Swift Transfer Pads, 它可以用于降低必要的蛋白的轉膜時間阻止潛在的問題發生,比如過熱.

        會降低蛋白轉膜不完全的比率。Swift Transfer Pads可以用于任何類型的蛋白,但是對于特別高分子量的蛋白轉膜很有幫助。有高分子量的蛋白或

        許需要更長的轉膜時間同時有很大的可能得到質量差的轉膜結果。低分子量的蛋白將更加容易的通過膜孔徑。

              實驗人員或許使用包含20%甲醇的轉膜緩沖液來進一步協助轉膜。如果轉膜持續失敗,那么操作的時間本身會有一些問題。

              質量差的蛋白轉膜如果使用正確的技術可以相對容易找到問題并解決它。G-Biosciences

        很多實驗室可以顯著降低浪費在印跡和troubleshooting印跡結果上的時間。

        滬公網安備 31011202012699號

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