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        蛋白純化之偶聯的配基應用
        瀏覽次數:30發布日期:2021-09-16
             

               糖類親和色譜是一種純化糖蛋白,凝集素和其他糖代謝蛋白的方法這種親和色譜使用糖類配基比如糖類,糖蛋白類和糖類基質用于純化?;|

        需要被活化用于配基的共價固定。用于偶聯配基的各種方法取決于活化的試劑如下:


        The divinyl sufone (DVS) 偶聯:


               Diviny sulfone (DVS) 是一種雙官能的化合物用于激活包含羥基基團的基質. DVS活化的基質能夠共價結合糖和碳水化合物通過存在于碳水化合

        物上的羥基。使用DVS來進行基質的活化是快速的,通常室溫70 min. 這種方法不僅引入一個高度反應性的乙烯基同時也有一個間隔臂來避免結合

        鍵的位阻. 這種二乙烯砜活化的基質是穩定的懸浮液在4°C 下可以保存一年。 DVS偶聯配基的連接化學性能在堿性條件下是不穩定的,因此凝集素

        的酸性洗脫是推薦使用當PH洗脫方法需要的時候。 


        環氧化物偶聯:

         

               環氧化物配基偶聯的方法使用雙官能化合物叫做環氧乙烷環氧乙烷比如 1,4-butanediol diglycidyl ether 被固定到瓊脂糖基質上來形成環氧化

        物活化的瓊脂。這種環氧化物活化的瓊脂在水溶液中是不穩定的因此應該立即被用于配基的偶聯。環氧化物瓊脂和配基形成共價鍵,這種配基包含

        親核物質比如氨基,巰基 ,羥基和酚功能基團。碳水化合物有自由的羥基能夠和環氧化物反應形成醚鍵。這個偶聯的化學反應能夠額外提供一個12

        原子的親水的位阻空間。因為這種偶聯條件對于碳水化合物來說要求高的PH值和高的溫度, 這種方法不推薦用于二氧化硅和玻璃微珠基質。 

        N-羥基琥珀酰亞胺偶聯:

        N-羥基琥珀酰亞胺方法中, N-羥基琥珀酰亞胺作為偶聯劑使用,這個偶聯劑能夠和包含胺基的配基形成穩定的化學鍵. 這種穩定的胺化學鍵在配基

        和偶聯劑之間形成.這種方法用于偶聯包含針對基質的胺基基團的糖蛋白或碳水化合物衍生物. 這種偶聯方法并且提供一個8個碳的空間位阻。


        溴化氰偶聯:

        這種偶聯方法用于固定包含氨基基團的配基。這種方法不適用于偶聯小分子因為它不能提供任何空間位阻。這種偶聯方法適用于固定糖蛋白.

        丙基硫氧嘧啶偶聯:

         

              丙基硫氧嘧啶活化的基質包含活化的 2-thiopyridyl disulphide基團能夠和包含巰基的配基發生可逆反應來形成混合的二硫化物. 它用于固定糖蛋

        白通過存在于糖蛋白上的自由巰基基團. 可以用于固定碘乙酰胺碳水化合物衍生物通過巰基的烷化. 丙基硫氧嘧啶偶聯的方法也提供一個空間位阻。


        吖內酯偶聯:

        吖內酯活化的基質是通過丙烯酰胺和吖內酯的共聚作用形成. 這種方法適用于包含氨基基團的配基反應從而適用于糖蛋白的結合.

        滬公網安備 31011202012699號

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