<u id="qs3yn"><small id="qs3yn"></small></u>

    1. <progress id="qs3yn"><acronym id="qs3yn"><thead id="qs3yn"></thead></acronym></progress>

      1. <source id="qs3yn"></source>
        您好,歡迎進入上海華雅思創生物科技有限公司網站!
        上海華雅思創生物科技有限公司
        產品搜索
        PRODUCT SEARCH
        產品分類
        PRODUCT CLASSIFICATION
        • --暫無新聞資訊--

        蛋白染色之和質譜技術兼容性最好的染色
        瀏覽次數:15發布日期:2021-09-17
             

               一旦蛋白質被SDS-PAGE或二維電泳分離, 蛋白可以通過不同的染色步驟進行觀察。對于這個應用,世界上大部分實驗室使用三種常規的蛋白染

        色技術: 考馬斯亮藍, 銀染色或熒光染色. 因此, 你如何知道哪種染色最適用于質譜?下面是你需要了解的信息來幫助你做出正確的決策。

        凝膠染色101: 理解基礎原理

               操作完SDS-PAGE之后, 將膠盒拆掉,薄的聚丙烯酰胺膠被放置到裝有水或者合適緩沖液的托盤上。電泳后的蛋白,呈現出濃縮條帶鑲嵌到凝膠

        基質中,結合到陰離子SDS去污劑中. 為了使這些條帶可見,這些凝膠基質需要被蛋白特定性的,染料結合或顏色產生化學物,比如銀染試劑或考馬

        斯亮藍試劑.

               為了得到最好的結果,您選擇的染色技術應該可以提供有力的,快速,以及簡單的步驟,同時應該有高靈敏度和高的重復性,以及廣泛的線性

        動力學范圍。除此之外,它應該兼容于下游的技術比如蛋白抽提和定量, 蛋白印跡, 以及質譜。

        哪種蛋白染色可以選擇用于下游的質譜? 

               所有的染色技術有他們自己的優勢和缺點因此您確實需要了解更多這樣才可以做出正確選擇。

        銀染試劑

               銀染染色是目前來說最靈敏的顯色方法用于檢測和觀察蛋白. 這種技術利用銀離子能夠強烈的結合到某些蛋白功能集團上,比如羧酸集團(Asp

          Glu),咪唑(His), 硫氫基 (Cys), 以及氨基 (Lys). 在顯色溶液的幫助下,銀離子還原成銀金屬從而出現了可視化的條帶.

               既然這種技術提供最高的靈敏度 (它可以用于檢測低于1ng的蛋白) 同時對于涉及到微量蛋白的應用來說會非常有用,同時它在使用中也有很多

        缺點. 包括如下:

        · 它是時間和勞動密集型的. 染色過程涉及多個步驟和試劑,凝膠染色之后需要加入顯色劑. 因為顯色需要的時間在各個膠之間變動很大,使用

        這個技術不能保證在定量分析中足夠的重復性。

        · 狹窄的線性動力學范圍. 這使得銀染不是非常適合進行定量.

        · 不能染色所有的蛋白. 銀染不好的地方在于不能對于常見翻譯后的蛋白修飾,比如糖蛋白和磷酸化蛋白進行染色。

        · 對于下游的應用提供有限的兼容性。傳統的銀染要求使用戊二醛或甲醛,這些化學物質能夠導致凝膠中蛋白的化學交聯。這限制了兼容方法

        的數量用于質譜分析。最新的質譜兼容銀染方法已經有商用的產品能夠提供更大的兼容性,但是仍然和傳統的銀染方法一樣有相同的缺點。

        考馬斯亮藍染色

               這可能是在全世界實驗室中最廣泛了解的蛋白染色技術. 有兩種主要類型的考馬斯亮藍染色, - 原始考馬斯亮藍染色和膠質考馬斯亮藍染色.

        在經典的考馬斯亮藍染色技術中,蛋白凝膠和考馬斯亮藍染料溶液一起孵育。因為這個過程染色所有的凝膠,所以之后通常使用甲醇/乙酸的脫色溶

        液進行漂洗來使蛋白條帶可視化。

               然而這種技術相對于銀染來說被認為靈敏度不夠(它的檢測極限是大約100ng)以及有低的可重復性。許多科研人員習慣于使用這種技術是因為

        它比較便宜以及操作簡單。除此之外,它不會修飾靶蛋白以及和質譜兼容。這個技術也被證明是足夠充分的對于簡單的任務比如可視化重組蛋白或

        生產抗體.

               為了克服銀染和原始考馬斯亮藍技術的局限性,研發人員現在使用膠質考馬斯亮藍染色來替代. 這種技術提供更高的靈敏度 (檢測極限大約

        4ng) 和可重復性 (這種膠質染料不會滲透到膠中因此它不需要脫色)和原始考馬斯亮藍染色技術相比.除此之外,它對于涉及到低蛋白水平檢測來說

        是理想的應用同時和質譜非常兼容。

               考馬斯亮藍染色主要的缺點在于比較低的靈敏度以及在質譜分析之前染料必須去除。

        熒光染料

               市場上有大量的熒光染料,他們中的絕大多數和質譜是兼容的?;驹碓谟跓晒馊玖虾偷鞍捉Y合后能夠被特定波長的發射熒光激活。熒光蛋

        白染色和銀染有相似的靈敏度,同時顯示出增強的質譜效果。.

               熒光染色確實也有一些缺點包括比較長的操作步驟(在一些情況下需要5個小時), 成本和仍然需要在質譜分析之前進行脫色.

        反向染色

               反向染色經常被忽視用于質譜的染色蛋白凝膠, 但是它和上面的染色方法相比確實有一些優點。

               最常規的反向染色是鋅染, 但是其他的金屬染色,比如銅染, 也是可以的。這種染色通過沉淀金屬到蛋白凝膠中, 然而SDS通過結合到蛋白上來

        阻止沉淀。這樣產生了反向或負染色凝膠圖像因為凝膠染為白色 ()或綠色 () 同時蛋白條帶是透明的,未染色這帶來了大量的優點因為無需脫

        色同時蛋白沒有因為染料的結合而得到修飾。 

               另外一個優勢是這種染色提供和銀染以及熒光染色同樣的靈敏度,以及它不會被蛋白翻譯后修飾所影響。這意味著所有的蛋白都可以被檢測

        到。

               反向染色經常被忽視因為它確實需要一些額外的技巧來操作,但是為了得到干凈,未染色的,未修飾的用于質譜分析的蛋白這種額外的努力是

        值得的。


        滬公網安備 31011202012699號

        av色欲无码人妻中文字幕_91视频精品_日韩无码操逼_亚洲三级网
            <u id="qs3yn"><small id="qs3yn"></small></u>

          1. <progress id="qs3yn"><acronym id="qs3yn"><thead id="qs3yn"></thead></acronym></progress>

            1. <source id="qs3yn"></source>