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        G-Biosciences離心式脫鹽柱Spin-OUT GT-1200 Medi的使用步驟
        瀏覽次數:1發布日期:2021-09-18
             

        G-Biosciences Spin-OUT GT-1200,與Pharmacia的Sephadex G-50的功能類似,都是用來代替比較耗時的傳統透析處理,以達到快速純化蛋白/替

        換蛋白質緩沖液的目的,不過前者是離心式的,后者是重力式的。GT-1200適宜于純化分子量大于12,000的蛋白質,有兩種上樣量規格的:Micro

        和Medi。沒有現成的使用說明材料,聽朋友介紹這是非常不錯的品牌,在國外很火。感興趣之余啃下其英文說明書了,先了解下其使用步驟:

        一、使用前準備:

             1.上下顛倒數次,將管中的凝膠懸浮起來,然后100×g離心1min,讓膠體回到管底。這里有兩點需要注意的:1)新的柱子看過去幾乎是透明

        的,不要認為什么填料都沒有,其實是顆粒太細了;2)離心力是×g,在離心機上顯示的是RCF這個單位,而不是RPM。這兩個單位有本質區別,

        需要特別留意。其中:

             RPM(revolution per minute)為離心機每分鐘的轉數(單位:周/分鐘);RCF(relative centrifugal force)為相對離心力,以地心引力即重力加速度的

        倍數來表示,一般用×g表示。 兩者轉換關系如下: RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r為離心機轉子半徑(單位:米)。

              2.拔掉兩頭的塞子,將柱子放在10ml離心管中,1,000×g離心2min以移除儲存buffer。離心完成后,即可看見白色的填充料。

        二、開始使用(交換buffer)

        1. 用緩沖液平衡柱子:加入1-2ml緩沖液,將柱子放到10ml離心管中,靜置數分鐘讓緩沖液全部進入柱體后,再重復加入3-5次。最后以

        1,000×g離心2min,棄掉收集到的溶液,以保證buffer被全部替換了。

        2. 將柱子放到新的離心管中,緩慢加入蛋白質樣品。注意,上樣量為Medi的柱子最多加入0.5ml樣品,上樣量為Micro的柱子最多加入

        0.1ml樣品。樣品加在柱子中間的凝膠上,而不要碰到樹脂部件。加樣結束后靜置1-2min,讓凝膠充分將樣品吸收。

        3. 將柱子放到一個新的離心管中,1,000×g離心4min,即可獲得純化好樣品了。

        三、柱子的再生

        1. 柱子可以重復利用。

        2. 需要用到2×蛋白質洗脫buffer,用量是每1ml填料使用1ml buffer。

        3. 加入洗脫buffer后靜置5min。

        4. 再用5倍填料體積的去離子水沖洗柱子。

        5. 最后用30% 的乙醇保存在4℃條件下。

        滬公網安備 31011202012699號

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