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        常見細胞轉染技術及原理
        瀏覽次數:7發布日期:2021-12-03
             

        常見細胞轉染技術及原理

        常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數,產生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩定轉染,外源DNA 既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性 DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(新霉素抗性基因),潮霉素b磷酸轉移酶(hph),胸苷激酶(tk)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。(新霉素抗性基因),潮霉素b磷酸轉移酶(hph),胸苷激酶(tk)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。

        今天小編帶大家了解一下不同細胞轉染技術的原理:

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        除上述傳統方法外,近年來國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉染技術,以其適用宿主范圍廣,操作簡便對細胞毒性小,轉染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的轉染性能最佳,但樹枝狀聚合物的結構不易于進一步改性,且其合成工藝復雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳個原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"(proton sponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉入各種種屬細胞,其效果好于脂質聚酰胺,經進一步的改性后,其轉染性能好于樹枝狀聚合物,而且它的細胞毒性低。大量實驗證明,PEI是非常有希望的基因治療載體。目前在設計更復雜的基因載體時,PEI經常做為核心組成成分。

        線型.PEI(Line PEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉染載體的研究比分枝狀PEI(Branched PEI,BPEI)要早一些,過去的研究認為在不考慮具體條件,LPEI/DNA轉染復合物的細胞毒性較低,有利于細胞定位,因此與BPEI相比應該轉染效率高一些。但最近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉染復合物,從而提高轉染效率,但同時細胞毒性也增大。超高分枝的、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基,在染實驗中發現這種PEI的毒性低,但轉染效率卻較高。

        滬公網安備 31011202012699號

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