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        QIAGEN REPLI-g單細胞基因組分析試劑的相關原理
        瀏覽次數:9發布日期:2021-12-21
             

        QIAGEN REPLI-g單細胞基因組分析試劑的相關原理

        QQ截圖20211206114451.png

        放大原理

        REPLI-g Single Cell Kit 使用等溫基因組擴增,稱為多重置換擴增 (MDA),它涉及隨機六聚體與變性 DNA 的結合,然后在恒溫下使用優化形式的 Phi 29 聚合酶進行鏈置換合成,具有異常強的鏈置換特性。額外的引發事件發生在作為模板的每條被取代的鏈上,從而能夠產生高產量的擴增 DNA(見圖“ 多位移放大(MDA)技術")。Phi 29 聚合酶是一種噬菌體衍生酶,是一種具有 3'→5' 引物核酸外切酶活性(校對活性)的DNA 聚合酶,其保真度比Taq DNA 聚合酶高 1000 倍。在獨特、優化的 REPLI-g 單細胞緩沖液系統的支持下,Phi 29 聚合酶可輕松解析二級結構,如發夾環,從而防止聚合酶在擴增過程中滑動、停止和解離。這使得生成高達 100 kb 的 DNA 片段而沒有序列偏差。

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        細胞裂解和 DNA 堿變性

        基因組 DNA 在用于酶促擴增程序之前必須變性,這通常使用苛刻的方法來完成,例如在高溫下孵育(熱孵育)或增加 pH 值(化學堿性孵育)。REPLI-g Single Cell Kit 使用溫和的堿性孵育,允許細胞裂解和 gDNA 的均勻 DNA 變性,DNA 片段化或無堿基位點的產生非常低。這導致擴增的 DNA 具有非常高的完整性,并使擴增片段的長度,從而使基因組位點和序列均勻呈現。

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        有效消除可檢測的 DNA 污染

        所有 REPLI-g Single Cell Kit 組件都經過獨特的受控凈化程序,以確保消除所有 REPLI-g 可擴增的 DNA 污染。緩沖液和試劑通過創新和標準化的程序暴露在紫外線輻射下,以確保不存在任何可檢測的殘留污染 DNA(見圖“ 創新的去污程序")。紫外線處理后,試劑盒經過嚴格的質量控制,以確保功能齊全。

        滬公網安備 31011202012699號

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